南京大户生物科技有限公司

    当今医学实验诊断领域，针对特定基因、抗原和抗体的检测试剂盒已非常普遍，但是却很少有厂家生产针对病原体抗原、肿瘤抗原或自身抗原等特异性T细胞的检测试剂盒，因为抗原特异性T细胞（Antigen-specific T cell, AST）的检测技术要比抗原、抗体和基因的检测困难很多，同时涉及三方面的限制因素：病原体抗原、肿瘤抗原或自身抗原的多样性和高度特异性；人类主要组织相容性抗原（HLA）的高度个体差异性；细胞操作和功能活性。但众所周知，AST是介导适应性免疫应答的核心细胞，在抗病毒感染、抗胞内菌感染、抗肿瘤、超敏反应、移植排斥以及自身免疫病中，抗原特异性的效应性T细胞和抗体是最主要的两种效应物质或致病物质，T细胞甚至比抗体更加重要。AST的数量和反应活性检测在监测疾病进程、指导治疗方案、评价临床疗效、预测疾病慢性转归以及疫苗效果评估等方面都有着不同于抗体的重要参考价值。但是，由于没有简便易行的T细胞检测技术和试剂盒，我国科研和临床界至今对患者AST数量或功能的检测仍然非常困难，因此关于特异性细胞免疫在各类疾病发展中的临床意义也极少报道，这在一定程度上限制了我国临床免疫学和精准医疗的更快发展。
    T 细胞膜上的TCR与抗原提呈细胞膜上pMHC分子（peptide/MHC复合体）的特异性结合是T细胞抗原特异性的物质基础。目前已见商业产品的AST检测技术只有胞内细胞因子荧光染色法流式分析法、ELISPOT和pMHC多聚体荧光染色流式分析等三种方法，但试剂种类极少，不适于临床应用，只在科研中有一些零星报道。
    本公司专注于抗原特异性T细胞检测技术及相关试剂盒的研发，致力于研制各种病毒感染性疾病、肿瘤以及自身免疫病的抗原特异性T细胞检测试剂盒及配套试剂，特别注重所研发试剂盒的系列性和全面性，即既能覆盖绝大多数HLA等位基因的患者，以适应临床检测需要，又能覆盖绝大多数的抗原种类和T细胞表位，以最大程度地展现患者的特异性细胞免疫功能状态，为精准医疗和临床免疫学研究提供基于患者HLA等位基因个体差异性的和病原性抗原特异性的细胞免疫学检测工具。
    目前已成功研发的主要产品包括：乙型肝炎病毒特异性T细胞个性化检测试剂盒（ELISPOT法）以及HLA-A、B、C等位基因分型试剂盒。本公司每类产品的特色简介如下：
1、HBV特异性T细胞个性化检测试剂盒（ELISPOT法）：
    本试剂盒选用所有频率大于1%的HLA-A等位基因（13种，在中国人群的总频率超过95.5%）所限制性的针对4种HBV抗原（HBsAg，HBeAg，HBpol，HBxAg）的105余种抗原肽，混合制备成7个HBV抗原肽库（2-3种抗原肽/HBV抗原/HLA-A等位基因），在96孔板中与HBV感染者的外周血单个核细胞（PBMC）共培养20小时，刺激HBV特异性CTL细胞活化并分析IFN-γ,通过ELISPOT方法检测患者PBMC中具有HBV抗原反应活性的CTL细胞数量。
    本试剂盒根据患者HLA-A等位基因的个体差异以及该等位基因所提呈的HBV抗原肽的个体差异来检测患者HBV特异性T细胞功能，属个性化检测，国内外没有同类产品。
    本公司利用具有相应HLA-A等位基因的HBV患者的PBMC进行细胞功能性实验，逐一验证了所用105种HBV抗原肽均具有免疫原性，且为抗原肽申请了发明专利。该方法简单易行，不需特殊仪器，患者不需要进行HLA-A基因分型，可以直接利用本试剂盒进行HBV特异性CTL细胞检测，在一般的具有细胞培养箱的实验室即可操作。

2、HLA-A、B、C基因分型试剂盒：
    本试剂盒采用了世界卫生组织国际组织相容性工作组（IHWG）推荐的HLA基因分型标准方法：PCR-SBT（PCR-Sequencing-Based Typing）,利用IHWG推荐的标准PCR扩增引物，分别对HLA-A、B、C三个I类基因位点进行高分辨率的等位基因分型。本试剂盒包括了从血细胞DNA提取到HLA基因位点特异性PCR扩增的所有试剂，用户将PCR产物快递给本公司，由本公司进行后续的基因测序、数据库序列比对和HLA等位基因判定等。所有费用都包括在试剂盒的销售价格中，而且费用远低于市场同类产品和技术服务。